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Das Setting soll wirklich in die Zeit der Italienischen Renaissance spielen und man wird in Sizilien und Venedig unterwegs sein. Jedoch wird man hierbei nicht in die Rolle von Altair schlüpfen, sondern in die von Ezio. Darüber hinaus soll nicht nur besagter Ezio eine Rolle spielen, sondern auch diverse andere Charaktere, wobei noch nicht gesagt wurde, ob man diese nur im Animus oder auch in der realen Welt steuern kann.

Da sich beim ersten Teil einige über die sich immer wiederholenden Missionen beschwerten, hat Ubisoft nun einige Fähigkeiten hinzugefügt, so dass Ezio schwimmen kann, was sich gerade in der Wassestadt Venedig anbieten würde. Weiterhin kann man seine Gegner nun auch vom Dach eines Hauses oder versteckt aus einem Heuballen heraus attackieren. Auf einem venedischen Ball kann man sich zudem hinter einer der typischen Masken verstecken, durch die Menge streifen und sein Ziel tänzerisch ausschalten, ohne dass jemand etwas mitbekommt.

Weiterhin wurden die Zwischensequenzen gestrichen, weswegen man anstelle dessen einige Quick-Time Event Einlagen geboten bekommt bei denen man richtig reagieren muss, damit die Handlung weiter voran schreitet.

Ubisoft-Mitarbeiter Sebastien Puel : Wir erzählen die Geschichte in einer Art, die sehr unvorhersehbar sein soll. Kein 'Noch X Morde, dann geht es weiter', sondern eine Story die sich durch die große Anzahl an Questgebern weiterentwickelt. Einige werden euch auf ein Attentat ansetzen, andere haben Einschüchterungs- oder Informations-Sammel-Missionen parat. Wir achten sehr darauf, viele Variationen im Gameplay einzubauen.